凯发K8国际一触即发

    随着我国中医药事业的不断发展，中医药逐渐得到世界的认可。中药以其充足的资源、独特的疗效、微弱的不良反应等优势，在保护人类健康方面具有重要作用。中药材作为中药产业的核心资源，其质量安全已受到国内外广泛关注。中药材在种植、采收、贮存及加工等一系列过程中，均可能受到真菌污染产生真菌毒素，真菌毒素是由真菌产生的天然有毒化合物，主要包括黄曲霉毒素类、赭曲霉毒素类、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和伏马毒素类等，近年来，多项研究表明中药材容易受到以上真菌毒素的污染，如何保证中药材质量安全已成为中医药行业亟需解决的重大难题。预防和控制中药生产质量和用药安全尤为重要，真菌毒素多组分、高通量的快速检测技术亟待开发。

    本文依据 2020 年版《中国药典》 “2351 真菌毒素测定法”中“六、多种真菌毒素测定法”中的内容，建立了使用K8凯发科技自主研发生产的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪 EXPEC 5210 测定西瓜霜中 28 种真菌毒素化合物含量的快速且高灵敏度的检测方法，为西瓜霜中真菌毒素类化合物含量检测提供参考。

样品、标准品、试剂和设备

   ; 仪器：EXPEC 5210 三重四极杆串联质谱仪；

    样品：西瓜霜；

    标准品：28 种真菌毒素的标准品购于天津阿尔塔；

    试剂：甲醇、甲酸、均为色谱纯，水为超纯水。

液相和质谱条件

正离子：

监测模式为多反应监测(MRM)

负离子：

监测模式为多反应监测(MRM)

样品前处理

    西瓜霜按照 2020 年版《中国药典》“2351 真菌毒素测定法”中“六、多种真菌毒素测定法”前处理方式进行，取供试品粉末约 5g（过二号筛），精密称定，精密加入 70%甲醇溶液 50ml，超声处理 30 分钟，离心，精密量取上清液 10ml，用水稀释至 20ml，摇匀。精密量取 3ml，缓慢通过已经处理好的 HLB 柱[规格：3ml（60mg），依次用甲醇和水各 3ml 洗脱]，直至有适量空气通过，收集洗脱液；随后用 3ml 甲醇洗脱，收集洗脱液，合并两次洗脱液，于 40℃氮气缓慢吹至近干，加 0.2%乙酸/（乙腈：水=1:1）溶液定容至 1ml，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，即得。

典型色谱图

按照上述 2.2 条件上机测试，真菌毒素的典型色谱图，如图 1 和图 2 所示。

图 1 正离子模式下真菌毒素典型色谱图（以 DON 计，3ng/ml）

图 2 负离子模式下真菌毒素典型色谱图（以玉米赤霉烯酮计，3ng/ml）

 线性和检出限

    标准曲线溶液配制：以空白西瓜霜基质配制系列梯度的真菌毒素标准溶液，以目标物的定量离子色谱峰面积为纵坐标，目标物标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，在对应的线性范围内，相关系数 r值均在 0.995 以上。

    以线性曲线最低点进样，定量限具体结果如表 3 和 4 所示。由表 3 和 4 可知，28 种真菌毒素定量限在 0.05μg/kg-5μg/kg 之间，均达到药典中规定的定量限要求。

表 4 正离子模式下部分真菌毒素灵敏度

表 4 负离子模式下真菌毒素灵敏度

重复性

    从真菌毒素储备液中吸取一定量的标准品，以空白西瓜霜基质稀释成标准曲线低（标曲点 4）、中（标曲点 7）、高浓度（标曲点 9）的对照品，进样 7 次，考察峰面积的重复性。真菌毒素的保留时间 RSD 在 0.38%以下，峰面积 RSD均在 8%以下，精密度较好。

回收率

    从真菌毒素储备液中吸取一定量的标准品进行基质加标实验。经过 2.3 样品前处理得到回收率。其中 OTA（赭曲霉毒素 A）回收率为 64.78%，AFB1 回收率为 61.97%，其他真菌毒素的回收率均在 72.84% -108.02%之间。

样品测试

    按照 2.3 中样品制备方法处理样品，批处理结果如下图所示，结果表明西瓜霜中未有 28种真菌毒素检出。

结语

    本实验依据 2020 年版《中国药典》考察了 28 种真菌毒素的线性、精密度、灵敏度、回收率等指标。实验结果表明 28 种真菌毒素相关系数 r 均大于 0.995，线性良好；28 种真菌毒素定量限在 0.05μg/kg-5μg/kg 之间。在低、中和高的浓度下，连续进样七针 28 种真菌毒素的保留时间 RSD 在 0.38%以下，峰面积 RSD 均在 8%，精密度较好，并且在低、中和高的浓度下，28 种真菌毒素的回收率在 61.97%-108.02%之间。由此可见，使用K8凯发科技高灵敏、高抗污染能力的 EXPEC5210 系统可以对西瓜霜中的 28 种真菌毒素残留量进行快速、准确、灵敏的定量检测。

附录

EXPEC 5210 型 LC-MSMS 配置清单