凯发K8国际一触即发

        前列腺素类似物（prostaglandin analogs，PGA）主要包括比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素，临床上可用于治疗青光眼、脱发、斑秃、炎症后色素减退等。临床研究发现，前列腺素类似物会造成虹膜颜色加深，视神经损伤，视力下降、失明等症状，甚至会在孕期导致胎儿畸变。

        欧盟化妆品法规（EC）NO 1223/2009 附件Ⅱ（禁用物质）和附件Ⅲ（限用物质）中，暂未对该类药物在化妆品中的添加作出规定， 2021 年国家药监局修订发布《已使用化妆品原料目录》中未收录含有前列腺素类似物的化妆品原料，但是已经引起相关组织机构的重视。将含有前列腺类似物的化妆品原料用于化妆品生产，违反《化妆品监督管理条例》的有关规定。国家药品监督管理局在 2021 年 9 月 13 日发布化妆品补充检验方法《化妆品中比马前列素等 5 种组分的测定》，建立高效液相色谱串联质谱法测定化妆品中比马前列素等 5 种组分，为监督执法工作提供技术支持，保障消费者的安全。

        因此，本文参考相关标准《BJH 202102  化妆品中比马前列素等 5 种组分的测定》，建立了使用K8凯发科技的超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱仪测定洗面奶中 5 种比马前列素的快速且高灵敏度的检测方法，为其化妆品中前列腺素类似物的测定提供参考。

实验部分

标准品、试剂和设备

        仪器：ULC 510 超高效液相色谱仪（具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器、柱温箱）、EXPEC 5210 三重四极杆串联质谱仪。比马前列素标准品：比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素，购自天津阿尔塔公司（含量均≥98.0%）；

        样品：洗面奶，购自市场，膏乳状；

        试剂：甲醇为 HPLC 纯，购自默克；乙腈为 HPLC 纯，购自默克；甲酸为 HPLC 纯，购自上海安谱；乙酸铵为 HPLC 纯，购自上海安谱；氯化钠为分析纯，购自永华化学股份有限公司；水为超纯水。

        前处理设备：涡旋振荡器、高速离心机、分析天平、超声波清洗仪。

图 1 超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪

液相和质谱条件

        监测模式为多反应监测(MRM)，硝基咪唑类化合物监测离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下图。

图 2 目标化合物监测离子对等质谱参数

样品前处理

         称取洗面奶 0.2g（精确到 0.0001g），置于 50mL 离心管中，加入饱和氯化钠溶液（称取40g 氯化钠置于 250mL 磨口锥形瓶中加入 100mL 水超声 15min 即得）3mL，涡旋 30s，分散均匀，准确加入乙腈 10mL，涡旋 30s，超声提取 20min，静置至室温，以 10000r/min 转速离心 5min，准确吸取上清液 5mL，加水定容至 10mL，混匀，经 0.22μm 滤膜过滤后，滤液作为供试品溶液备用（供试品溶液可根据实际浓度进行适当稀释）。

空白基质溶液：称取空白试样 0.2g（精确到 ;0.0001g），置于 50mL 离心管中，自准确加入饱和氯化钠溶液 3mL 起与样品同样处理，作为空白基质提取液。

标准溶液配制

        标准储备液：称取比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素标准品各 10mg（精确到 0.00001g），分别置于 10mL 棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，

摇匀。标准储备溶液的质量浓度均为 1000mg/L，置于-18℃冰箱中避光保存。

        混合标准储备溶液：准确移取比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素标准储备溶液和曲伏前列素、他氟前列素标准储备溶液适量，用甲醇配制得比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素浓度为 10 mg/L、曲伏前列素和他氟前列素浓度为 100 mg/L 的混合标准储备溶液，置于-18℃冰箱中避光保存。

        分别精密量取混合标准储备溶液适量，用空白基质溶液配制得基质混合标准系列溶液，比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素梯度浓度分别为 50ng/mL、25ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL 和 0.1ng/mL，曲伏前列素和他氟前列素梯度浓度分别为 500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2ng/mL 和1ng/mL。基质混合标准系列溶液现用现配。

线性

        按照 2.4 配制不同浓度的标准工作溶液，依次进样分析，使用外标法定量，以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，对应标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，标准曲线信息如下所示。

灵敏度

        精密量取混合标准工作溶液适量，按 2.3 样品处理制成不同浓度的基质溶液，按 2.2 方法测定，以特征离子质量色谱峰大于 3 倍信噪比（峰-峰）的浓度为检出限，大于 10 倍信噪比（峰-峰）的浓度为定量限。本方法中 5 种比马前列素化合物的检出限和定量限低于国标要求。

加标回收率和精密度

        精密量取混合标准工作溶液适量，按 2.3 样品处理制成比马前列素、他氟乙酰胺和拉坦前列素浓度为 0.5 ng/mL、0.8 ng/mL、2.5 ng/mL、5 ng/mL 和 10 ng/mL 的基质溶液；曲伏前列素和他氟前列素浓度为 5 ng/mL、8 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL 和 100 ng/mL 的基质溶液，

 按 2.2 方法进样测试（n=6），计算加标回收率和精密度结果。

5 种比马前列素类化合物加标浓度 0.5 ng/mL 回收率为 80.07%~104.37%，精密度相对标准偏差为 5.72%~7.34%（n=6）；加标浓度 0.8 ng/mL 回收率为 86.90%~105.12%，精密度相对标准偏差为 4.55%~7.25%（n=6）；加标浓度 2.5 ng/mL 回收率为 90.24%~108.56%，精密度相对标准偏差为 3.45%~6.13%（n=6）；加标浓度 5 ng/mL 回收率为 91.99%~105.94%，精密度相对标准偏差为 2.62%~4.81%（n=6）。

样品测试结果

        洗面奶样品经过 2.2 样品前处理后测试结果如下所示。

 表 8 洗面奶样品中 5 种比马前列素测试结果

         洗面奶供试品中的比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素和他氟前列素均未检出。

结论

        本文使用K8凯发科技 EXPEC 5210 LC-MS/MS 对洗面奶供试品中比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素和他氟前列素进行分析，考察方法的线性、灵敏度、精密度、加标回收率。在线性范围内，5 种比马前列素类化合物的线性系数均大于 0.999。5 种比马前列素类化合物检出限低于 0.0511 mg/kg，定量限低于 0.1533 mg/kg。洗面奶供试品中的比马前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素和他氟前列素均未检出。本方法满足标准 BJH 202102 要求，适用于化妆品中 5 种比马前列素的测定。

附录

EXPEC 5210 型 LC-MSMS 配置清单