罗丹明 B(Rhodamine B),是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。易溶于水、乙醇, 微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液。呈红色至紫罗兰色粉末,水溶液为蓝红色,稀释后有强烈荧光,醇溶液有红色荧光。也可作为食品染色剂使用,但在 2017 年 10 月世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中,罗丹明 B 在 3 类致癌物清单中。因此,本文参考《BJS 201905 食品中罗丹明 B 的测定 》,建立了使用K8凯发科技的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪测定食品中罗丹明 B 含量的快速且高灵敏度的检测方法。
实验部分
仪器:ULC 510 超高效液相色谱仪(具体配有二元超高𝔉压输液泵、超高压自动进ꦦ样器(含冷却功能)、柱温箱)、EXPEC 5210 三重四极杆串联质谱仪。
标准品:罗丹明 B꧙(纯品,液体),购自 A ChemTek, Inc.,于-20℃冰箱保存。试剂:超纯水,甲酸为色谱级(CNW),甲醇(色谱级,美国 TEDIA)。
液相和质谱条件
监测模式为多反应监测(MRM),各化合物监测离子对、碰撞电压(CE)等参数见下表
线性和检出限
用甲醇稀释得到一系列浓🍰度的罗丹明 B 标品(0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/ml、20ng/ml),按照上述方法进样,以各目标物的定量离子色谱峰面积(Y)为纵坐标, 目标物标准溶液的质量浓𒀰度(X)为横坐标,权重系数为 1/x,采用外法拟合后的标准曲线如下
图 1 所示。标准曲线最低点定量离子色谱图如图 2 所示,配置 0.5ng/ml 标准溶液进样,按照S/N♈=10 和 S/N=3 计算定量限和检出限,结果如下表 1 所示。且本实验🦩的检出限完全符合《BJS 201905 食品中罗丹明 B 的测定》的要求。
图 2 罗丹明 B 的定量限的色谱图(0.5ng/ml)
重复性
分别配置 𝐆0.5&n﷽bsp;ng/mL 和 5ng/mL 不同浓度对照品,分别连续进样 6 次,考察保留时间和响应的重复性。
&nb🌟sp; 0.5ng/ml 重复性:保留时间和响应的 RSD 值分别是 0.00%和 1.9%。
5ng/ml 🎃重复性:保留时间和响应的 RSD 值分别在 0💧.00%和 6.9%之间。
可知所有化合物的保留时间和📖峰面积均在 6.9%以下,精密度较好。
结语
样品经提取等前处理过程,使用 LC-MS/MS 系统进行测定。本文考察了方法的线性、精密度、灵敏度等✃,结果表明: 罗丹明 B 在检测范围内线性良好,相关系数均大于 0.99;方法精密度在 6.9%以内,灵敏度符合国家标准要求。使用高灵敏、高抗污染能力的 EXPEC 5210 系统,可以对食品中罗丹明 B 含量进行灵敏、准确的定量检测。
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